背景:
在生物制品的制備/生產過程中,去除DNA殘留是極為重要的。在過去幾年里,重組蛋白類生物藥物的發展突飛猛進,并且在未來依然前景廣闊。在微生物系統中,這些重組蛋白一般都是通過微生物的發酵,并且通過裂解微生物細胞而釋放出來。然而,在釋放出目標產物的同時,細胞裂解物會同時產生一些雜產物,比如宿主細胞蛋白、核酸(DNA以及RNA)、細胞內毒素以及一些其他宿主細胞雜質。重組蛋白藥物中的DNA殘留可能會給患者體內帶入激活的致癌基因,或者作為潛在的感染病毒DNA致使患者被感染。因此,DNA殘留量是重組蛋白藥物的一個重要的評價標準。世界上許多權威機構都對重組蛋白類藥物中的宿主DNA殘留量做出了嚴格的規定,對于每支疫苗中的DNA殘留量,WHO規定不可以超過l0ng,美國FDA規定不可以超過l0pg,我國規定為l00pg以下。
概述:
NuclecutTM全能核酸酶(SuperNuclease)是一種核酸內切酶,可將核酸降解成2~5個堿基的5'-單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線狀,環狀)的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性,因此被稱為“全能核酸酶”。全能核酸酶可以非特異性裂解單鏈以及雙鏈的DNA和RNA,并切割出一個3'-OH和5'-磷酸基(如圖1),主要用于重組蛋白、病毒疫苗、細胞和基因治療用病毒載體、溶瘤病毒及其它生物制品中DNA/RNA去除。該酶在0~42℃的均有活性,最適溫度為37℃。有效的pH范圍6.0-10.0,最適pH為8.0。發揮活性需要Mg2+存在,1-2mM為最佳。在去污劑、SDS、尿素等存在下仍然保持一定活性。
產品包裝:
NuclecutTM 全能核酸酶(SuperNuclease)包裝規格如下:
目錄號 | 規格 |
RA-NC01-A |
10KU |
RA-NC01-B |
50KU |
RA-NC01-C |
500KU |
產品儲存于20mM Tris-HCI,pH8.0,2mM MgCl2,20mM NaCl和50%(v/v)甘油中,不添加防腐劑。
產品來源:
NuclecutTM 全能核酸酶序列來源于Serratia marcescens,重組表達于E. coli,單體理論分子量約27.5KD,C端帶6×His標簽。
產品特性:
NuclecutTM 全能核酸酶可非特異性降解所有形式的DNA和RNA(單鏈的、雙鏈的、線性的和環化的),將核酸完全消化為長度為3至5個堿基的5'-單磷酸末端寡核苷酸。
產品質量:
1. 高活性:≥1×106U/mg 蛋白、≥250U/μl;
2. 高純度:通過SDS-PAGE檢測,純度≥90%;
3. 高穩定性:每批產品都經過嚴格的質量控制,以實現產品批間穩定性。
4. 無蛋白酶活性:偶氮酪蛋白法分析無蛋白酶活性。
儲存條件:
采用干冰運輸,收到產品后請立即將其置于-20℃保存。
應用:
1、可從重組蛋白及其它生物制品中去除DNA/RNA
2、適用于病毒疫苗、細胞和基因治療用病毒載體及溶瘤病毒的純化
3、降低由核酸引起的粘度
4、在二維凝膠電泳和色譜中制備樣品
5、防止細胞結塊,尤其是冷凍細胞
6、降低哺乳動物細胞提取物的粘度
7、降低大腸桿菌細胞裂解液的粘度以增強過濾性
8、從包涵體中純化蛋白